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三聚氰胺快速检测试剂盒图片
产品货号:
FZ018
中文名称:
三聚氰胺快速检测试剂盒
英文名称:
Melamine Quick ELISA Kit
产品规格:
96T/盒
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测奶粉、牛奶、组织、饲料、蛋类、血清等样本中的三聚氰胺(Melamine)含量。



检测原理:

试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样本溶液,样本中的三聚氰胺和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含三聚氰胺含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中三聚氰胺的残留量。



基本信息:
灵敏度2ppb(ng/mL)
反应模式25℃,30~15分钟
检测下限奶粉:40ppb
牛奶:54ppb
牛奶/奶粉(处理法二):2ppb
组织(鸡/猪/鸭/鱼/虾/肝脏):4ppb
饲料:200ppb
蛋类:40ppb
血清:8ppb
交叉反应率三聚氰胺:100%
三聚氰酸:60%
三嗪、三嗪二铵:1%
样本回收率牛奶、奶粉:90%±20%
组织:85%±20%
饲料:85%±20%
蛋类:80%±20%


产品组成:
组分规格
三聚氰胺标准液(0ppb)1mL
三聚氰胺标准液(2ppb)1mL
三聚氰胺标准液(6ppb)1mL
三聚氰胺标准液(18ppb)1mL
三聚氰胺标准液(54ppb)1mL
三聚氰胺标准液(162ppb)1mL
三聚氰胺高标准液(1ppm)1mL
酶标记物5.5mL
三聚氰胺抗体工作液5.5mL
底物液A6mL
底物液B6mL
终止液6mL
20×浓缩洗涤液40mL
2×复溶液50mL
三聚氰胺酶标板(96孔)1块
盖板膜1张
自封袋1个

保存:2~8℃,避免冷冻,有效期1年。

用户自备:
  • 仪器:酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)。
  • 微量移液器:单道20μL~200μL,100μL~1000μL、多道300μL。
  • 试剂:乙腈、氢氧化钠、浓盐酸、正己烷、甲醇。


注意事项:
  • 试剂盒各组分从冷藏环境中取出时,必须平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的试剂组分应及时放回2~8℃密封保存。
  • 试剂盒请在有效期内使用,拆开的试剂盒尽量在3个月内用完,以免拆开后保存不当失效。
  • 试剂盒在使用过程中,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
  • 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象,所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
  • 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
  • 试剂盒中有些组分具有腐蚀性或毒性,避免接触皮肤。
  • 实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。
  • 本方法为筛选方法,如遇阳性样本请用确证方法进行确认。
  • 试验过程遇到任何问题,请与厂商联系。


溶液配制:
  • 1M HCl溶液:取8.6mL浓HCl加去离子水混匀,定容至100mL。
  • 乙腈-0.1M NaOH溶液:84mL乙腈和16mL 0.1M NaOH混合均匀。
  • 0.1M NaOH溶液:称取0.4g NaOH加去离子水混匀溶解,定容至100mL。
  • 1M NaOH溶液:称取4g NaOH加去离子水至100mL。
  • 复溶液:将2×复溶液用等体积去离子水2倍稀释,用于样本的复溶,复溶液在4℃环境可保存一个月。
  • 工作洗涤液:将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。


样本处理:
牛奶样本
  • 取牛奶样本600μL到2mL的离心管中,加入1mL乙腈,充分振荡混匀;4000r/min离心5min。
  • 取100μL上清液,加入900μL复溶液,混匀。
  • 取50μL用于分析。
样本稀释倍数:27,检测下限:54ppb
奶粉样本
  • 称取2.0±0.05g奶粉样本至50mL离心管中,加入4mL甲醇,充分振荡。
  • 4000r/min离心10min,取100μL上清液,再加入900μL复溶液,混匀。
  • 取50μL用于分析。
样本稀释倍数:20,检测下限:40ppb
牛奶/奶粉样本处理方法二:
  • 取2mL奶样或2g奶粉至离心管中。
  • 加入8mL乙腈-0.1M NaOH充分振荡2min,4000r/min离心10min,取4mL上清液50~60℃下氮气或空气流吹至完全干燥。
  • 用1mL正己烷溶解干燥的残留物后,再加入1mL复溶液,混合30s,离心去除上层正己烷相。
  • 取下层水相50μL用于分析。
样本稀释倍数:1,检测下限:2ppb
组织样本
  • 取2.0±0.05g均匀组织样本于50mL离心管中。
  • 加入8mL乙腈-0.1M NaOH充分振荡2min,4000r/min离心10min,取2mL上清液50~60℃下氮气或空气流吹至完全干燥。
  • 用1mL正己烷溶解干燥的残留物后,再加入1mL复溶液,混合30s,离心去除上层正己烷相。
  • 取下层水相50μL用于分析。
样本稀释倍数:2,检测下限:4ppb
饲料样本
  • 将饲料样品研碎,称2.0±0.05g研碎的饲料样品,加入2mL 1M HCl,加入16mL去离子水均质。
  • 旋流1min,放振荡器上振荡2min。
  • 4000r/min离心15min,取出10mL上清液并用1M NaOH将pH值调至6-8。
    因饲料样品的不同,加入1M NaOH的量有所差异,根据情况调节,一般加入范围是0.5mL~1mL之间。
  • 4000r/min离心15min,吸出上清液。
    如果上清仍然浑浊可提高转速或用滤纸过滤。
  • 取上清液用复溶液10倍稀释。
    取100μL上清液加入900μL复溶液,混合均匀。
  • 取50μL进行分析。
样本稀释倍数:100,检测下限:200ppb
蛋类样本
  • 用均质器低速均匀样本(蛋清、蛋黄或全蛋)。
  • 称取2.0±0.05g均质过的样本,加入8mL乙腈-0.1M NaOH充分振荡2min。
    蛋清含蛋白高,加提取液后会形成一团胶状物,较蛋黄或全蛋难摇匀,此情况为正常现象不影响实验结果。
  • 4000r/min离心10min,取1mL上清液50~60℃下氮气或空气流吹至完全干燥。
  • 用1mL正己烷溶解干燥的残留物后,再加入1mL复溶液,混合30s,离心去除上层正己烷相。
  • 取下层水相用复溶液4倍稀释(50μL样本液加150μL复溶液),混合30s。
  • 取50μL用于分析。
样本稀释倍数:20,检测下限:40ppb
血清样本
  • 取0.5mL血清样本于50mL离心管中;
  • 加入2mL乙腈-0.1M NaOH充分振荡2min,4000r/min离心10min,取1mL上清液50~60℃下氮气或空气流吹至完全干燥。
  • 用1mL正己烷溶解干燥的残留物后,再加入1mL复溶液,混合30s,离心去除上层正己烷相。
  • 取下层水相50μL用于分析。
样本稀释倍数:4,检测下限:8ppb


使用方法:
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2~8℃。
  • 编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
  • 加样反应:加标准品或样本50μL/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50μL/孔,再加入50μL/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
  • 洗涤:小心揭开盖板膜,甩去孔内液体,每孔加350μL工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
    用吸水纸拍干,拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破。
  • 显色:每孔加入底物液A 50μL,再加底物液B 50μL,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。
    若蓝色过浅,可适当延长显色反应时间。
  • 终止:每孔加入终止液50μL,轻轻振荡混匀,终止反应。
  • 测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。


结果分析:
  • 百分吸光率的计算:标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%.
    百分吸光度值(%)=A×100%
    A0
    A:标准溶液或样本溶液的平均吸光度值;A0:0ppb标准溶液的平均吸光度值。
  • 标准曲线的绘制与计算:以标准液百分吸光率为纵坐标,对应的标准液浓度(ppb)的对数为横坐标,绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

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